Анализ фитохимических характеристик катуабы, продолжение:
Ванилин взаимодействовал с флаванолами и образовывал красный аддукт (субстанцию). А при реакции с хлоридом железа на ТСХ (тонкослойной хроматографии) проявлялся коричневато-серый цвет. Оба изменения характерные для флавана-3-олов. Наличие этих компонентов подтверждается показателями ультрафиолетовых спектров составляющих при максимальном излучении в 278 нм в процессе проведения анализа HPLC-DAD (ВЭЖХ-ДАД).
В таблице 1 приведены данные масс-спектрометрии (МС), полученные при проведении анализа ВЭЖХ-ESI-MS / MS экстрактов на основе гексана, хлороформа, водно-спиртового и водного экстрактов из коры Trichilia catigua. Масс-спектральные данные, полученные с помощью тандемной масс-спектрометрии высокого разрешения, описаны в обсуждениях.
Идентифицировать компоненты удалось благодаря полученным MS данным, и с учетом данных о MS, которые были выявлены ранее несколькими авторами при исследовании похожих видов. Подробности описаны в обсуждениях. Как видно по табл. 1, в четырех экстрактах, включая экстракты аполярного гексана и хлороформа, были обнаружены цинхонан IIa (4), цинхонан Ia (7) и cinchonain Ib (12). Апоцинин E (5), глюкозид цинкхонаина IIa (9) и глюкозид цинхонаина IIb (10) были обнаружены только в экстракте на основе хлороформа. Тогда как процианидин B2-8-C-рамнозид (2) и процианидин B2 – (эпи) -катехин – ( эпи) -катехин (3) были обнаружены только в водно-спиртовом экстракте. В водном экстракте были обнаружены те же составляющие, которые содержатся в водно-спиртовом экстракте, кроме процианидинов. Спектры ВЭЖХ-ESI-MS / MS компонентов 1-12 представлены в виде дополнительного файла 1.
Таблица 1
Отчет о MS-данных, полученных при анализе экстрактов на основе гексана (HEX), хлороформа (CLO), водно-спиртового (HA) и водного (AQ) экстрактов из коры Trichilia catigua с помощью HPLC-DAD-ESI-MS / MS
Компонент | Регистируемое время | Показатели масс-спектометрии и соотношение массы к заряду на пике фрагментации | Предполагаемая структура | Экстракт на основе гексана | Экстракт на основе хлороформа | Водно-спиртовой | Водный |
1 | 4.0 | [M – H]? – 341 | 6-O-кофеоил глюкозид | – | X | X | X |
2 | 14.1 | [M – H]? – 723 | процианидин B2–8-C-рамнозид | – | – | X | – |
3 | 15.3 | [M – H]? – 577 | процианидин В2 (эпи) -катехин – (эпи) -катехин | – | – | X | – |
4 | 17.2 | [M – H]? – 739 | цинхонаин IIa | X | X | X | X |
5 | 18.0 | [M – H]? – 467 | апоцинин Е | – | X | – | – |
6 | 19.0 | [M – H]? – 353 | 3-О-кафеоилхиновая кислота | – | – | – | X |
7 | 19.6 | [M – H]? – 451 | цинхонаин Ia | X | X | X | X |
8 | 21.4 | [M – H]? – 613 | бис- (3,4-дигидроксифенилпропаноид) -замещенный катехин | – | X | X | X |
9 | 22.2 | [M – H]? – 901 | цинхонаин IIa глюкозид | – | X | – | – |
10 | 24.4 | [M – H]? – 901 | цинхонаин IIb глюкозид | – | X | – | – |
11 | 24.8 | [M – H]? – 613 | цинхонаин Id-7- глюкозид | – | – | X | X |
12 | 26.4 | [M – H]? – 451 | цинхонаин Ib | X | X | X | X |
Анализ DPPH
Активность накопления DPPH при введении четырех экстрактов T. catigua (таблица 2). Наиболее сильный эффект был обнаружен при введении водно-спиртового экстракта (EC50= 43 мкг / мл). Его показатели были подобными к показателям рутина, который использовался в тестах как контрольный образец.
Таблица 2
Уровень накопления радикалов DPPH и угнетения выделения радикалов ацетилхолинэстеразы при введении разных экстрактов Trichilia catigua
Экстракты и контрольные образцы | Уровень накопления радикала | Уровень угнетения выделения радикала IC50 в ацетилхолинэстеразе AChE (мкг/мл) |
Экстракт на основе гексана | 53 (28–136) | 346 (270–502) |
Экстракт на основе хлороформа | 60 (35–145) | 313 (193–1128) |
Водно-спиртовой экстракт | 43 (7–210) | 142 (112–196) |
Водный экстракт | 52 (24–150) | 315 (230–527) |
Рутин | 44 (9–216) | – |
Ривастигмин | – | 18 (0–136) |
Стабильный уровень EC50, IC50 и 95% предельных уровней (в скобках) рассчитывали линейной регрессией, используя средние показатели при проведении анализа 3-4 раза для каждого экстракта.
Активность ацетилхолинэстеразы
Экстракты T. catigua показали ингибирующую активность радикалов AChE in vitro, причем водно-спиртовой экстракт был наиболее эффективным для радикала IC50= 142 мкг / мл (таблица 2). Показатели ривастигмина, контрольного образца, были IC50= 18 мкг / мл.
Двигательная активность
Спонтанное введение мышам водно-спиртового экстракта T. catigua (50 и 500 мкг / кг, м.т.) не влияло на уровень двигательной активности (p> 0,05) в течение 120 минут наблюдения (схема 1). В тех же условиях и дозах такое введение не влияло на координацию движений на ротароде (p> 0,05, дополнительный файл 2). Это свидетельствует о том, что экстракт в таких дозах не нарушает двигательную активность животных.
Схема 1
Спонтанная двигательная активность мышей, которым систематически вводили водно-спиртовой экстракт Trichilia catigua (катуабе) в дозах 50 и 500 мкг / кг (перорально). Столбцы обозначают средние показатели ± SEM (к = 10), полученные путем проведения ANOVA (двухфакторного дисперсионного анализа).
Стресс при иммобилизации и охлаждении
При иммобилизации и охлаждении повышался уровень индуцирования АКТГ (3,35) = 40,05; p <0,001 3=”” 35=”” 103=”” 81=”” p=”” 0=”” 001=”” 8=”” 10=”” 22=”” 11=”” 7=”” 29=”” 30=”” 02=”” t=”” catigua=”” 25=”” 250=”” 05=”” span=””>
Таблица 3
Эффект от введения крысам водно-спиртового экстракта Trichilia catigua (TC) (25 и 250 мкг / кг, м.т.) на протяжении 14 дней: степень и индекс изъязвления, вызванного стрессом; вес надпочечников, тимуса и селезенки; уровень АКТГ и кортикостерона. За основу взяты средние показатели ± SEM (к = 9-10)
Группа | Степень изъязвления | Индекс изъязвления | Вес надпочечников(мг) | Вес тимуса (мг) | Вес селезенки (мг) | Уровень АКТГ (пг/мл) | Уровень кортикостерона (мкг/дл) |
Контрольная группа | 3.2 ± 0.3 | 15.3 ± 3.1 | 54.4 ± 3.8 | 326.8 ± 21.1 | 809.8 ± 48.3 | 812 ± 31 | 980 ± 62 |
Те, которых не тестировали | 0.3 ± 0.2* | 0.6 ± 0.3* | 52.8 ± 2.6 | 434.2 ± 22.9* | 1470.1 ± 72.6* | 71 ± 27* | 88 ± 35* |
Водно-спиртовой экстракт 25 мкг/кг | 3.7 ± 0.4# | 19.4 ± 4.4# | 60.1 ± 2.0 | 286.0 ± 29.0# | 840.6 ± 49.5# | 735 ± 70# | 1012 ± 44# |
Водно-спиртовой экстракт 250 мкг/кг | 3.3 ± 0.4# | 13.2 ± 2.3# | 62.3 ± 2.7# | 301.3 ± 26.4# | 791.3 ± 66.0# | 833 ± 84# | 1080 ± 40# |
(*) p <0,05 -=”” p=”” 0=”” 05:=”” anova=”” span=””>двухфакторного дисперсионного анализа) и последующей проверкой ретроспективным анализом Duncan.
Принудительные упражнения на беговой дорожке
Мышей принудительно заставляли заниматься физической активностью на беговой дорожке до начала эксперимента и спустя 21 и 49 дней (3-я и 7-я неделя) с момента начала введения водно-спиртового экстракта T. catigua. Различий во времени появления признаков усталости не было среди подопытных всех групп (p> 0,05) на трех временных этапах (схема 2а). А уровень лактата в плазме после тренировки был увеличен только у подопытных, которые принудительно занимались бегом (4,40) = 9,05; p <0,001 21=”” -=”” 2b=”” span=””>
Схема 2
А – появления признаков усталости (минимальное время), В – уровень лактата в плазме, С – спонтанная двигательная активность мышей, которым вводили водно-спиртовой экстракт Trichilia catigua (TC) (25, 100 и 250 мкг / кг, перорально) и принудительно заставляли заниматься физической активностью на беговой дорожке. Колонки и столбцы обозначают средние показатели ± SEM (к = 8-10). (*) p <0,05: span=””> изменение статистических показателей групп, которые тестировались; (#) p <0,05 span=””> изменения статистических данных контрольной группы. Результаты были определены путем проведения ANOVA (двухфакторного дисперсионного анализа), и последующей проверкой ретроспективным анализом Duncan.
Спонтанная двигательная активность мышей контрольной группы (которую не подвергали принудительным упражнениям) была выше, чем у подопытных других групп, при тестировании, проведенном на 21 день с момента начала введения водно-спиртового экстракта (4,40) = 10,65; p <0,001. 49=”” 4=”” 39=”” 1=”” 09=”” p=””> 0,05. С другой стороны, показатели группы, получавшей 250 мкг / кг экстракта T. Catigua отличались от показателей фокус-группы (подопытные которой принудительно занимались упражнениями) на 21 день. У них была повышенная двигательная активность (p <0,05) 2c=”” span=””>
Оценка мышечной силы сцепления после переутомления показывает, что между группами (p> 0,05) не было различий в показателях на 21 и 49 день с момента начала введения водно-спиртового экстракта (схема 3а). Разница в силе сцепления до и после упражнений также не была выявлена (схема 3b). С другой стороны, когда мы сравнивали результаты после упражнений в разные моменты времени, мы наблюдали, что показатели подопытных группы, которой вводили T. catigua в дозе 250 мкг / кг были выше (3,30) = 3,61; p <0,05, 49=”” 49-=”” 3c=”” –0=”” 05=”” –=””>
uaguarana@gmail.com
Пн-Сб 10.00 до 15.00
